此法采用定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为WNT6已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何WNT6目前被绑定的固定化抗体。共轭的抗体特异性WNT6除去任何未结合的物质后，加入到孔中。抗蛋白共轭的辣根过氧化物酶（HRP）的洗涤后，加入到孔中。经过洗涤，以除去任何未结合的抗蛋白的酶试剂，底物溶液加入到孔中，显色成比例的量的初始步骤中的约束的WNT6。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。ELISA试剂盒

   血清：使用血清分离管（SST）和全血标本在室温下两小时或4℃过夜℃，然后离心15分钟，在1000×g下。删除上清即可检测，或分装和店内样品在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。

此法具有较高的灵敏度和特异性好，检测鼠标WNT6。观察鼠标WNT6和类似物之间无显著交叉反应或干扰。

精度： 

批内精密度（内检测精度）：CV％<8％

三种已知浓度的样品进行了测试20次在一个平板上进行评估。

间精密度（精密检测间）：CV％<10％

已知的三个样本20检测到的浓度进行了测试评估。

样品采集和存储：

等离子：采集血浆中EDTA或肝素作为抗凝血剂。在2-8°C在30分钟内收集离心15分钟，1000×G。即可检测，或分装保存样本在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。

检测程序：

在使用前，将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议，所有样品和标准来测定一式两份。

1。准备好所有试剂，工作标准和样品在前面的章节中。

2。请确定井数的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥剂，密封保鲜袋，将未使用的井在4°C的含量布局表

。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时，在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。

4。每孔中取出的液体，不洗。

5。向每孔中加入100μl抗体（1倍）。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时，在37℃下（抗体（1X）可能会出现混浊。预热至室温，轻轻混匀，直到出现均匀解决方案。）

6。吸液的各孔和洗涤，共洗涤三次重复该过程两次。洗净，每孔填充洗涤缓冲液（200μL）使用喷瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，静置2分钟，*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后，清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。

7。向每孔中加入100μl的HRP-抗蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一个新的粘接剂条。温育1小时，在37℃下

8。重复的愿望/洗涤过??程中，在步骤6的5倍。

9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟，在37℃下避光

10。一站式解决方案，每孔加入底物，轻轻晃动酶标板，以确保充分混合。

11。在5分钟内，设置至450nm，使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正，设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接，可能会比较高，不太准确。

计算结果：

建议使用专业的软“曲线专家1.3”的标准曲线。
平均每个标准和样品的重复读数和平均减去零标准的光学密度。

标准曲线，通过减少使用能产生四参数逻辑（4-PL）的曲线拟合的计算机软件的数据。作为一种替代方法，建立标准曲线，对在y-轴的浓度通过绘制在x-轴为每个标准的平均吸光度，并绘制一个通过在曲线图上的点的zui拟合曲线。该数据可以通过绘制的WNT6浓度与日志的OD值和拟合直线的日志，可以通过回归分析确定线性化。此过程会产生足够的，但不太的适合的数据。

如果已稀释的样品，从标准曲线上读出的浓度必须乘以稀释因子。ELISA试剂盒